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怎样进行菌种保藏?
来源: | 作者:niang.pro | 发布时间: 2021-01-22 | 569 次浏览 | 分享到:
  保藏纯种微生物,首先要使保存的微生物不死,然后尽可能地保持菌种的优良性能不变,也就是不使菌种衰退变异。总之,菌种保藏的日的是使菌种不死、不变,不污染。不论哪一种保藏方法,最基木的原理不外乎让微生物处在代谢活动不活泼的休眠状态。保持休眠状态的孢子和芽孢,比保存菌体更有利。从保藏条件来讲,主要是保证低温、干燥和缺氧,迫使徽生物休眠。根据保藏规梗的大小及微生物类型的差别,可选择不同的方法。

  1.琼脂斜面法
  若保藏的菌株需要经常移植,或在短时间内要使用,使用琼脂斜面法最为方便。具体做法如下。
  (1)室温保藏  将琼脂斜面试管菌株放在室温下,一般为15~22℃。这种方法容易引起微生物缓慢生长而衰老,因此室温保藏的菌种需要经常移接,但移接的次数越多,发生变异的可能性也越大。在室温下保藏霉菌,试管棉塞用熔化的石蜡封固,一般要3-4个月移接1次。保藏酵母菌用10~42Bx的麦芽汁或米曲汁琼脂,培养2~3天的菌株试管.棉塞用石蜡熔封,每2个月移接1次。有的细菌比较娇嫩,则需每月移接1次。
  (2)冰箱保藏  将已生长好的琼脂试管菌株,放置在4℃冰箱中保藏。霉菌5-6个月移植1次,毛霉科菌易死.1~2个月移植1次;酵母菌3个月移植1次;无芽孢细菌每月移植1次;某些娇弱的菌种、则要几周移植1次。

  2.低温保藏
  普通4℃冰箱保藏也属于低温保藏。在这个温度下,可以保藏试管琼脂菌种、砂土管和冻干安瓿等。
  (1)低温保藏通常在-20℃保藏真菌是成功的。但在0--30℃范围内,可能出现水与电解质共晶混合物,这就有可能损害菌体的存活性。
  (2)超低温保藏把菌种放在有液态氮的超低温冰箱中,超低温至-150~-196℃,可能可以保存各类微生物.这是近年来国际上发展的一项新技术,理论上认为,在液态氮的低温下,菌种不会发生遗传变异,而又能保持存活。但还有待于进一步验证。

  3.矿油保藏
  矿油又称液体石蜡。将灭菌矿油注人已生长好的试管琼脂斜面菌种,可以成功地保存许多类型的微生物。自1914年法国Lumiere等人介绍这一方法以来, 世界各国先后采用。荷兰的巴恩菌库设立了专门的油管保存处。许多不适于冷冻、干燥保藏的真菌,如某些毛霉科菌,用此法可以长期保存其活性。同样,保存酵母菌用此法也较适宜。矿油保藏的方法如下。
  (1) 矿油处理将矿油装入三角瓶, 加棉塞, 在0.1MPa下灭菌30min.在40℃温箱中烘干。
  (2)保藏在无菌操作下,用无菌吸管灌注矿油,需高出菌种斜面1~1.5cm.在试管架上直立保藏。在室温或冰箱中可以保藏6~12个月。使用时取出,倾去矿油,移植于新鲜斜面培养基中。矿油可以回收使用。

  4.干燥保藏
  简单的干燥保藏法,是把微生物菌体混于灭菌的沙土中装人试管,管口加棉塞,用石蜡熔封。同样,如用灭菌的硅胶片、纸片、瓷球、麸皮和其他类似物,也可以像沙土一样用来保藏菌种。

  5,冻干法
  1921年Swift报道了冻干法保藏细菌, 以后逐渐发展为各国大菌库保藏菌种的常规方法。用此法保藏细菌可达10年左右,保藏真菌的效果也较好。但是,有不少报道指出,不长孢子或长孢子稀少的真菌,用冻于法保藏不好。因为冻干菌种一般都用真空熔封的安瓿瓶保藏.取菌时,启开安瓶瓶,如不小心,常易引起污染。
  最常用的冷冻真空干燥保存法,因其备低温、真空、千燥三个条件,适宜于各类微生物的保藏。虽然手续麻烦,需一定的设备条件,然而存活率高,变异小,保存时间可长达1-20年之久。

  6.液态干燥法
  澳大利亚皇家医院Annear多年的工作表明, 菌体在恒温液态条件下, 直接抽真空干燥,可以成功地保存许多难以保藏的菌种,其成活率比冻干法要高得多。